熒光pcr凍干粉和普通的pcr相比具有很多優(yōu)點(diǎn)，可以常溫運(yùn)輸，常溫儲(chǔ)存，保存時(shí)間長(zhǎng)，使用方便，性質(zhì)穩(wěn)定等。但是熒光PCR試劑并不是拿過(guò)來(lái)放進(jìn)凍干機(jī)中就可以直接凍干了，凍干物質(zhì)的共同特點(diǎn)是基本上90%以上的凍干物質(zhì)都需要添加凍干保護(hù)劑包括賦形劑，否則容易不成型或者凍出來(lái)不理想。

那么熒光PCR試劑凍干常采用哪些凍干保護(hù)劑呢？首先我們先來(lái)看兩個(gè)發(fā)明。以下出自發(fā)明專(zhuān)：

1、本發(fā)明提供一種凍干添加劑及熒光PCR反應(yīng) 混合物干粉和制備方法，具體涉及生物技術(shù)領(lǐng) 域，凍干添加劑包括A組分和B組分，A組分由二硫蘇糖醇、吐溫20、海藻糖、明膠和BSA組成，B組分 由叔丁醇組成。將該A組分加入到熒光PCR反應(yīng)混合物原液的其他組分中存儲(chǔ)待用，凍干前再將B 組分加入獲得熒光PCR反應(yīng)混合物原液，后凍 干得到熒光PCR反應(yīng)混合物干粉。本發(fā)明制備的 熒光PCR反應(yīng)混合物干粉保證擴(kuò)增性能的同時(shí)， 縮短凍干時(shí)間，減少凍干成本，并使凍干后的成 品結(jié)實(shí)，不易碎，并且能長(zhǎng)期保存。該發(fā)明出自《一種凍干添加劑及熒光PCR反應(yīng)混合物干粉和制備方法》。

2、本發(fā)明公開(kāi)一種熒光PCR試劑的凍干保護(hù)劑 以及凍干芯片的制備方法，涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng) 域。所述凍干保護(hù)劑為由以下組分制備得到的溶 液：海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油，以及焦磷酸二乙酯處理過(guò)的水。由該凍干保護(hù)劑制備得到的熒光PCR凍干制劑可長(zhǎng)期常溫保存，且復(fù)溶速度快。本發(fā)明還提供一種包括上述凍干保護(hù)劑的熒光PCR凍干芯片的制備方法，該方法簡(jiǎn)單快速，可在八小時(shí)內(nèi)完成凍干步驟。該發(fā)明出自《熒光PCR試劑的凍干保護(hù)劑以及凍干芯片的制備方法》。

通過(guò)以上兩個(gè)發(fā)明可以看出熒光PCR試劑的凍干保護(hù)劑常用的包括：1、糖類(lèi)和多元醇類(lèi)。糖類(lèi)有單糖、低聚糖、多糖。其中海藻糖和棉子糖屬于低聚糖，一般凍干保護(hù)劑中的糖多用低聚糖或者單糖和其他保護(hù)劑連用。海藻糖和蔗糖是糖類(lèi)中zui常用的。兩個(gè)發(fā)明中均有使用海藻糖。常用的多元醇類(lèi)包括：山梨醇、甘露醇和甘油（丙三醇）。其中甘露醇和甘油都是比較常用的。2、聚合物：聚合物具有能提高生物制品混合溶液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，同時(shí)起著低溫保護(hù)劑和脫水保護(hù)劑的作用。其中，典型的的聚合物類(lèi)保護(hù)劑有聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、牛血清（BSA）、右旋糖苷（dextran）、聚乙二醇（PEG）等。 3、表面活性劑既能在凍結(jié)和脫水過(guò)程中降低冰水界面張力所引起的凍結(jié)和脫水變性；又能在復(fù)水過(guò)程中對(duì)活性組分起到潤(rùn)濕劑和重褶皺劑的作用。 常用的包括吐溫\Triton X-100\蔗糖脂肪酸脂、十二烷基硫酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚。4、氨基酸類(lèi)的保護(hù)劑：如甘氨酸，谷氨酸等。這兩個(gè)配方中沒(méi)有添加。氨基酸離子具有酸、堿兩性，因此能夠在生物制品的低溫保存和冷凍干燥過(guò)程中能抑制溶液的pH變化，從而達(dá)到保護(hù)活性組分的目的。

緩沖劑：調(diào)節(jié)PH，保持ph的穩(wěn)定。常見(jiàn)的多為鹽類(lèi)如：磷酸、乙二胺四乙酸、氯化鈉、氯化鈣、磷酸鹽、醋酸鹽和檸檬酸鹽等。6、叔丁醇：在凍干配方中加入適量的叔丁醇（Tertiary Butyl Alcohol）后，凍結(jié)時(shí)會(huì)形成針狀結(jié)晶；冰晶升華后，留下了管狀通道，使水蒸汽流動(dòng)阻力大大減小，升華速率顯著提高。

從以上分析可以看出基本上一個(gè)完整的凍干保護(hù)劑體系是由多種保護(hù)劑連用。其中有的起保護(hù)作用，有的起調(diào)節(jié)穩(wěn)定作用，有的起加速作用，還有的起填充劑和賦形劑的作用。其實(shí)按照凍干保護(hù)劑的篩選原則，逐步篩選優(yōu)化就能找到凍干保護(hù)劑的組合配方。由于不同的熒光PCR體系成分不一樣，因此所采用的凍干保護(hù)劑量和種類(lèi)不同，需要根據(jù)情況選擇合適的糖、多元醇、活性劑及緩沖劑等。